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荧光定量PCR仪相关对照问题的处理
点击次数:716 发布时间:2018-04-23
 
   荧光定量PCR仪相关对照问题的处理
  1.阴性对照和阳性对照都出现阳性扩增带
  原因:
  ①阴性样品和PCR反应试验污染。
  ②电泳上样时避免PCR产物漂移到其他孔而影响结果判定。
  解决方法:
  ①更换全部试剂,必要时更换所有移液器。
  ②应小心操作,或琼脂糖凝胶加厚,增加每孔的容量,可避免加样液的溢出。
  2.阳性对照呈阴性
  原因:
  ①阳性样品或加入阳性模板失效。无论是组织还是血清,冻融1次后病原数量明显减少。
  ②加入试剂量不准确或遗忘了某一成分。
  解决方法:
  ①将阳性对照样品分成小包装。每个包装够用1次好。
  ②仔细核对试验记录,校对移液器。
  3.出现非特异扩增带
  原因:
  ①样品模板量过多。
  ②引物或TaqDNA聚合酶多。
  ③镁离子浓度过高或退火温度过低。
  解决方法:
  依据荧光定量PCR仪具体实验的情况,分析上述可能出现的原因,采取相应的措施。
  4.阳性对照扩增带弱
  原因:
  ①电泳时琼脂糖中EB含量少或长时间后再用已失效。
  ②扩增效率不高。
  解决方法:
  ①是将琼脂糖凝胶放入含有EB电泳液中再染30 min后再观察。
  ②检测仪器是否正常工作。
  ③增加纯化DNA或cDNA样品的稀释倍数。
 
北京科誉兴业科技发展有限公司(www.byfr.tw)主营Micro17R/21R离心机,Eppendorf5424R离心机,Bio-Rad伯乐C1000,T100PCR仪,Leica DMi1倒置显微镜
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